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直播答疑 | 细胞培养答疑专场

更新时间:2023-12-28  |  点击率:487
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12月14日的直播中,普诺赛直播间为大家介绍了细胞黑点、细胞状态变形、细胞空泡、聚团、脱落等常见问题,直播回放请至B站 -“普诺赛生物"进行观看。本期直播答疑,从直播间提问中,筛选出部分有代表性的问题,做了详细解答。如有其他问题,也欢迎大家在公众号留言,我们将在线解答。


消化时间过长会损伤细胞吗?

消化时间过长会导致细胞膜蛋白的改变,最直观的表现就是消化后第二天漂浮细胞很多或者贴壁慢。

胰酶消化不掉的,二次消化对细胞损伤

小还是机械吹打对细胞损伤小?

建议二次消化。细胞与细胞间的连接没有通过酶切开的话,用移液枪进行吹散后细胞会被撕裂,直接导致细胞不贴壁甚至死亡。

悬浮细胞聚团怎么处理?

悬浮细胞聚团,要分情况进行处理:

▪ 原本就是聚团生长的细胞,不用干预,比如NK-92等就是聚团生长;

▪ 如果是非聚团生长的细胞,比如THP-1聚团了,要区分高密度和低密度。高密度可以轻轻吹散细胞后进行低速离心,去除里面夹杂的死细胞,正常传代即可改善;

▪ 非聚团生长的细胞低密度时,聚团一般是细胞状态不太好,需要调整状态。排查是否有污染以及培养环境合不合适等问题,对症改善后细胞即可正常生长,聚团改善;

▪ 刚复苏的悬浮细胞也会出现聚团,一般是静置培养和少动,期间可以用补液和半换液的方式培养,等细胞密度长起来,生长至对数生长期时,团块问题也会改善。

培养细胞系有很多无规则运动的小黑点,

培养基未浑浊、变黄,细胞生长速度不

变,形态变化不大。请问这是什么污染?

这个情况比较符合血清沉淀或者细胞碎片分泌物之类的,一般不用过于关注,细胞能够茁壮生长就可以了。

猪肺泡巨噬细胞做实验,一般可以传多

少代以内?

如果是猪的肺组织提取的原代巨噬细胞,一般是终末分化的细胞,是不能增殖的,只能转移到孔板做实验。

要收集细胞分泌的蛋白时,培养基中加

不加FBS?应该怎么选择?

一般要做分泌蛋白都是不建议加血清的。血清里面可能有一些蛋白类未知成分,不排除会和实验的目标蛋白有反应或者类似,所以通常都是用的无血清。

提取的原代细胞不贴壁,怎么办?

原代组织分离后体外培养通常会有类似的问题,需要选择合适的包被试剂进行辅助贴壁,这是原代提取比较常见的操作。

如果对细胞的均匀度要求很高,有没有

好的方法可以提高铺板时细胞的分布匀度?

首先是细胞消化后尽量成单颗,铺板的时候需要练习下手法,不要有旋涡产生,导致分布不均匀;除开铺板手法外,细胞本身特性导致的容易聚团生长,可以尝试包被培养瓶以后低密度接种细胞,可能会达到比较好的单层贴壁的情况。

消化时胰酶要预温吗?水浴锅预温可以吗?

胰蛋白酶属于酶制品,受温度影响,反复的4℃- 37℃的温度波动反而会导致酶失活,效果不好,所以不建议37℃复温。4℃拿出来可以直接用,加入到细胞消化的时候放进培养箱就好了。

我养的上皮细胞消化下来有很多像葡萄串

一样的细胞团,吹打也不能让细胞分开。

这种情况一般还是消化不充分导致,建议可以适当延长消化时间,待细胞与细胞间的连接打开后再进行吹散,一般是很容易吹散的。





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