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细胞学堂 | A-498细胞知识盘点

更新时间:2023-12-26  |  点击率:376
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A-498(人肾癌细胞)细胞由Aaronson·S建立,是从一名52岁女性肾癌患者的肾组织中分离出的具有上皮形态的细胞系。该细胞系是一种合适的转染宿主,在肿瘤研究中具有一定的应用价值,常作为肾细胞癌研究的模型





本期细胞学堂为大家整理了A-498细胞的培养条件与传代、冻存步骤及常见应用,帮助您快速上手开展实验。





细胞形态

A498细胞贴壁生长,呈上皮样形态,细胞铺开面积大,单位面积细胞总数量少,少量细胞有触角;

低密度时可观察到单个细胞清晰的边缘,密度大于100%时边缘不清晰,细胞与细胞之间没有间隙;


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A-498细胞显微镜图






培养方法

培养条件

MEM+10% FBS+1% P/S;

气相:空气,95%;二氧化碳:5%;

温度:37℃;培养箱湿度:70%-80%;

生长特性

贴壁生长,上皮细胞样;

倍增时间

33-36h;

冻存条件

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度:液氮



A-498细胞的传代

01

细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养;

02

弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次;

03

加1mL胰酶(含0.25% EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化2-3min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆、分离并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化;

04

3-4mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4min,弃去上清液,补加2-3mL培养液后吹匀;

05

收到细胞后首-次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的已添加好新鲜培养基的皿中或者瓶中,传代后每个T25培养液总体积是5-6mL,后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

 注意事项 


A-498细胞铺开面积大,单位面积细胞总数量少,需要合理控制传代密度,建议细胞密度80%时,1:2-1:4传代,2-3天换液或传代一次


A-498细胞的冻存

有血清程序冻存(需梯度降温):

01

配置冻存液,冻存液推荐配比:55%(基础培养基)+40%(血清)+5%(DMSO)或90%胎牛血清+10%DMSO;

02

制备好的细胞悬液计数,计算总细胞量;

03

细胞离心后尽量吸干净上清,离心转速1200rpm(250g)3min;

04

加入配置好的冻存液重悬,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL

05

分装入冻存管,一个冻存管分装1~1.5mL;

06

推荐使用程序降温盒,分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜;

07

从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。






常见应用

 A498细胞常作为肾细胞癌研究的模型

通过转染调节特定信号通路,研究其对细胞增殖、侵袭的影响;

研究药物对肾癌细胞进展的抑制作用,筛选肿瘤药物;

通过A498在动物体内造模,模拟肾细胞癌细胞在体内行为,研究肾细胞癌生物学特性等。






参考文献

[1]张悦,于学炜等.黄芪甲苷调节 miR-21 基因抑制肾癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的机制探讨[J].现代肿瘤医学,2020,28(18):3145-3149

[2]Yan Sun,Liang Zhu,et al.ZDHHC2-Mediated AGK Palmitoylation Activates AKT–mTOR Signaling to Reduce Sunitinib Sensitivity in Renal Cell Carcinoma. Cancer Res (2023) 83 (12): 2034–2051.http-s://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-22-3105





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