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细胞学堂 | 如何判断细胞状态

更新时间:2023-09-28  |  点击率:620

培养细胞时,由于培养的环境各不相同,同时细胞各阶段的形态也存在一定差异,没有一个确定的参照物去比对,很多老师同学也无法确定自己所养细胞的状态是否正常。

那么如何判断细胞状态是正常还是异常呢?本期细胞学堂将详介绍几种常用的判断方法,学会这几招,轻松辨别细胞状态!




01 如何判断细胞活率





台盼蓝染色法




台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,可以检测出细胞是否存活。正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。活细胞不着色,而死细胞会被染成蓝色




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(无色为活细胞,蓝色为死细胞)

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染色时间不能太长,3分钟内观察,超时后活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果出现偏差。





显微镜观察法




在显微镜下观察细胞形态:


悬浮细胞

活细胞透亮有光泽,死细胞暗淡无光且膜碎裂;


贴壁细胞

活细胞可贴壁且膜完整,死细胞不能贴壁。


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(红色圈为死细胞;绿色圈为活细胞;箭头为血清杂质)


细胞膜作为判断细胞活性的标准之一,有的老师用“边界清晰"来界定,认为边界不清晰则是细胞状态变差,实际情况我们也有发现部分细胞膜边缘很薄再加上显微镜不清晰导致误判,所以小普认为膜边界是否清晰并不是金标准,我们更倾向于以细胞膜完整性作为判断标准,“膜完整"则为活细胞。


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(该细胞膜边缘薄透,若为黄光显微镜可能看不清)






02  如何判断细胞形态异常


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1

你的细胞应该长成什么样?

在怀疑细胞形态改变之前,我们首先得知道一个正常的细胞应该是什么样的,诚如每颗多肉都会有其独-特的色彩和习性,细胞也有其独-特的习性,包括生长速度、形态、培养环境等;




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2

从哪几个方面判定细胞形态异常?


细胞的微环境会导致细胞形态改变,例如血清直接影响细胞的形态:



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HK-2细胞显微图(无血清培养基培养)




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HK-2细胞显微图(MEM +10%FBS培养)




是否所有的形态改变都可以被定义为异常呢?答案是否定的。从上述例子中可以看出,两种培养环境下细胞形态不同,但状态都并无异常,因此我们需要视不同情况、综合细胞增长速度进行评判:



未更换培养体系时

在培养体系没有更换的前提下,细胞碎裂增多,黑点增多、形态改变、生长速度变慢,则应考虑外源刺激物导致,可能已被污染,需排查污染源,并做针对性的预防措施。

更换了培养体系时

1

如果是因为更换了培养体系后导致的细胞形态改变,在细胞生长速度正常的情况下,可正常培养;

2

如果细胞更换培养条件后,严重变形甚至贴壁减少且不能正常传代,必须进行干预,可通过包被培养瓶促进贴壁、增加血清浓度、与原培养基混合使用让细胞过渡适应等方式进行改善;

3

如果细胞对于新环境反应激烈,直接死亡,则需更换培养体系;






03  如何判断细胞污染




细菌污染


有以下特征之一,应考虑细菌污染:

1

显微镜高倍镜下可观察到直径比细胞小的高度重复颗粒;

2

细菌颗粒会持续快速增多;

3

培养基迅速变黄或者浑浊;

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真菌污染


有以下特征之一,应考虑细菌污染:

1

培养基里肉眼可见霉菌菌落;

2

显微镜下异物边缘呈扫帚边、树枝状;

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交叉污染


细胞交叉污染比较少见,也较难辨别,除非形态特征差别很大的两个细胞交叉污染,才能从显微镜肉眼辨别,主要还是依赖鉴定技术,可以通过STR鉴定、同工酶等方法来进行鉴定。


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