欢迎来到武汉普诺赛生命科技有限公司网站!
咨询热线

400-999-2100

当前位置:首页  >  技术文章  >  大鼠心肌细胞培养需要注意哪些问题

大鼠心肌细胞培养需要注意哪些问题

更新时间:2023-09-20  |  点击率:834
  H9c2 (2-1)大鼠心肌细胞是一株由Kimes·B和Brandt·B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到的细胞株;H9c2(2-1)细胞表现出许多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管,并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%,H9c2(2-1)细胞融合发生得很快。
 
  培养大鼠心肌细胞时,需要注意以下几点:
 
  1、鼠龄选择:新生1~3d龄大鼠的心肌细胞在出生后3d内具有部分的增殖能力,而成年大鼠的心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力。因此,建议选择1~3d龄的大鼠进行原代培养以获得更多活性心肌细胞。
 
  2、细胞复苏:溶解细胞过程要迅速,已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久,需要尽快离心去除DMSO。
 
  3、细胞冻存:推荐配比为55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO的冻存液。在冻存时,尽量吹散细胞并注意控制吹打力度。
 
  4、细胞培养:培养条件为培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S,推荐传代比例为1:2~1:4,换液频率为2~3次/周,培养箱温度设定为37℃,5% CO2。传代操作包括:去掉培养皿中的培养基,加入PBS进行冲洗,去上清后加入0.25%胰酶进行润洗,去上清后放入CO2培养箱消化2~4min,加入培养基终止消化并吹打均匀。
 
  5、注意保持细胞汇合度在30%~90%,避免细胞过度生长和分化。
 
  6、每一步操作都要轻柔小心,以免对细胞造成损伤。
 
  7、选用优质培养基,减少有害物质对细胞的刺激。