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普诺赛4月直播答疑:常见细胞污染类型及解决方法

更新时间:2022-05-07  |  点击率:1851

在4月28日开播的“常见细胞污染类型及解决方法"课程中,有很多老师就细胞污染提出了疑问。我们筛选出部分代表性问题,并作了详细解答。

 

01

Q:在细胞培养液中,有种可以游动的虫子是什么污染?

A:是细菌污染。带鞭毛的细菌就是会游动的。

 

02

Q:有很多黑点,在原位颤抖,没那么明显的定向运动,是什么污染?

A:细胞碎片、血清沉淀和有些细菌污染,都会在原位颤抖。前者是原地做不规律的布朗运动,细菌是原地转动,频率会高很多。

 

03

Q:血清的絮状物杂质属于正常现象吗?

A:血清里面有一些大分子蛋白和一些纤维析出,呈现絮状,也有一些磷酸钙析出呈现小黑点,这些都是很常见的。沉淀太多,可以离心去掉部分。血清沉淀的多少也跟血清的溶解方式有关,溶解过程中最好是4℃,期间不时摇晃进行溶解。根据普诺赛多年培养细胞经验,血清的沉淀多与少并不决定血清质量

 

04

Q:液体变微黄、浑浊怎么解决?

A:这个是典型的细菌污染。如果细胞形态尚且完整,可以尝试用10%的双抗清洗去除,或者使用别的抗生素清除,如庆大霉素50U/mL、四环素10μg/mL等;如果细胞状态已经很差,就没有挽救的价值了。

 

05

Q:为什么有的培养基天天需要换液呢?

A:正常情况下,是不需要每天换液的。培养基橘黄色是细胞比较喜欢的环境,正常是2~3天换一次比较好,换液多了细胞状态反而容易受影响。如果是因为培养基异常消耗,才需要每天换液,那么我们要做的是找到异常消耗的原因,是细胞量过多,还是有其他细菌或者支原体污染。先找到原因才能不用每天换液。

 

06

Q:我冻存的细胞,每次复苏养几天就污染了,是什么原因呢?

A:如果冻存前就带进去了污染,那么同一批次的复苏出来都会有污染。这种情况下,可以在复苏当天给予抗生素清除(不能用双抗),如庆大霉素50U/mL、四环素10μg/mL等;如果同一批有复苏没有污染的情况,要考虑复苏过程,建议换一下水浴锅的水和其他试剂耗材再复苏。

 

07

Q:细胞培养不生长,传代扩不起来,是不是就是支原体污染?

A:支原体污染肉眼是很难区分的,支原体污染会导致细胞状态变差,但是细胞状态变差并不是都是支原体造成的,所以我们还是要用支原体检测加以区分

 

08

Q:培养基污染以后,可以过滤一下继续使用吗?

A:不建议继续使用。培养基里面可能会有残留的细菌分泌物,比如内毒素等,可能会影响细胞生长。

 

09

Q:培养箱水盘用什么抑菌剂?

A:传统方法用硫酸铜,但是硫酸铜属于重金属,还是有一定的毒性的。建议使用水浴锅安全卫士,安全无毒,可以持续一周无菌状态

 

10

Q:试剂已经全部换新的了,还是一直污染,是什么原因?

A:如果试剂盒耗材全部更换了,还需要排除下冻存前是否有污染。再就是是否存在操作问题,可考虑换其他人养一下试试。

 

11

Q:悬浮细胞碎片形成的黄团怎么处理呢?

A:悬浮细胞碎片形成的黄团可以通过低速离心去除,前提是细胞量一定要够多,转速一般可以降低到800rpm左右。离心完上清别急着丢,先看下细胞是否已经离心下来,也可以根据细胞大小调节离心转速。

 

12

Q:细胞里面有一些小方块一样的东西,是什么原因?

A:小方块一般是结晶类的。可以先用培养基或者PBS稀释溶解后换液,看有没有改善。

 

13

Q:放了五个月的*培养基,出现絮状悬浮物,但是观察不是细菌,可以过滤后加点血清继续使用吗?

A:不建议继续使用。絮状物首先要排除霉菌类的污染;即使排除了霉菌,完培产生絮状物析出了,也会对成分有一定的影响,影响后期培养细胞。

 

14

Q:饲养杂交瘤细胞,如果观察有没有污染,大概要在多大倍镜下观看?

A:观察污染的话400倍镜就够了,10X目镜加40X物镜。

 

15

Q:请问贴壁细胞表面有白膜,培养液恶臭,是什么原因导致的污染?

A:有白膜和恶臭应该是有污染无疑了,还很严重,具体是细菌还是真菌,要结合显微镜下的菌体形态来进一步区分

 

16

Q:细胞污染后,用10倍双抗处理后,没有再长,这时细胞可以冻存吗?

A:细菌不再生长,恢复正常1%抗生素后一周内没有再长起来,就是清除干净了,可以冻存

 

17

Q:孵箱中一瓶细胞有黑胶虫污染,慢慢地整个孵箱都有污染了,那孵箱怎么打扫?

A:把细胞全部转移走,再用消毒液把培养箱全部擦拭一遍;培养箱水一定要清理干净;培养箱角落和表面都喷上细胞房卫士,关闭培养箱保持30分钟,再打开散气30分钟,换上干净的无菌水就行了。

 

18

Q:请问培养箱灭菌水多久换一次呢?换的时候每次都要90℃灭菌么?

A:水浴锅的灭菌水不加抑菌剂的话,建议是每次复苏前都更换新的;加了水浴锅安全卫士,可以一周换一次,水是121℃灭菌20分钟

 

19

Q:液氮有没有可能污染?

A:理论上液氮这种极-端的环境里,是不会有生物存活的,细菌冻存也是需要保护剂的。

 

20

Q:新复苏的细胞,一天后正常贴壁,但是培养液里悬浮大量的黑色团块,是什么原因呢?

A:可能是有细菌污染了,还是要结合显微镜下的黑团形态来进一步确诊。

 

5月直播课“细胞传代增殖问题",将于5月26日开播,大家记得关注哦~