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大鼠骨髓间充质干细胞的分离方法主要有这两种

发表时间:2022-04-06  |  点击率:227
  大鼠骨髓间充质干细胞是在哺乳动物骨髓基质中发现的细胞亚群,具有多种分化潜能,可分化成骨、软骨、脂肪、神经和成肌细胞。它们不仅机械地支持骨髓中的造血干细胞(HSC),而且还分泌多种生长因子(如IL-6、IL-11、LIF、M-CSF和SCF)来支持造血。
  常用的MSC分离方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法。全骨髓法是根据干细胞在低血清培养基中的优势特性,定期更换溶液去除非贴壁细胞,从而达到纯化和扩增MSC的目的。密度梯度离心是根据骨髓中各细胞成分的不同比例,分离出单核细胞进行贴壁培养,两者本质上没有太大区别。随着对MSC表面抗原认识的深入,有人采用免疫方法,如流式细胞仪、免疫磁珠等。然而,流式或磁珠分选细胞增殖缓慢等问题,加上成本高、技术难度大等问题,在一定程度上限制了这些方法的广泛应用。

 

大鼠骨髓间充质干细胞
 

 

  大鼠骨髓间充质干细胞细胞培养必须保持工作区域无菌和清洁。先用紫外线灯和臭氧消毒1h,然后通风30min。操作前需更换细胞间专用拖鞋,戴上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒,戴上实验服,戴上一次性口罩和帽子,操作时不要大声说话,整个无菌操作应在酒精灯周围进行。
  在大鼠骨髓间充质干细胞的原代培养过程中,可在约24小时内发生贴壁生长。细胞呈圆形、梭形和三角形,生长缓慢。液体交换后细胞增殖明显,呈梭形为主,形态多样。70%-80%可在10-14天融合,达到通过标准。传代细胞形状单一,有纺锤形或扁平形,增殖至细胞融合时呈涡旋状和放射状排列。