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小鼠骨髓间充质干细胞要如何提取?

发表时间:2022-04-18  |  点击率:70
  小鼠骨髓间充质干细胞一般采用长骨解剖和骨髓分离的程序。总体目标是快速、系统地取出长骨,收集骨髓细胞进行进一步的实验分析。该方法有助于回答有关骨髓生物学、肿瘤转移和免疫学的关键问题。这种技术的主要优点是解剖过程快速且标准化,骨髓分离过程相当无菌。首先,将小鼠杀死并置于仰卧位。
  然后将小鼠的四个爪垫固定在踝关节下方,用70%乙醇喷洒小鼠并彻底清洗腿部。接下来,在臀部正上方的下腹部中线右侧做一个小切口,将切口向下延伸至腿部并穿过脚踝,拉回皮肤。
  然后将固定在股骨近端的股四头肌切开,露出腿骨前部,用销钉将腿上的肌肉与板成45度角固定。将剪刀压在股骨后部,从膝关节剪下腘绳肌。然后将固定在股骨近端的皮肤和腘绳肌向后拉,露出骨后部,用固定销45度角从腿上固定腘绳肌。
  用镊子抓住股骨远端,就在膝关节上方。然后将股骨干两侧的剪刀刀片导向髋关节。到达股骨头后,扭动剪刀,将顶部刀片直接移动到股骨头上方,使股骨脱臼。
  用镊子抓住股骨干的顶部,从股骨头上切下软组织,将股骨从髋臼中取出。然后将包括股骨、膝盖和胫骨在内的整个腿骨从身体上拉出来,小心地切断连接腿和皮肤的结缔组织和肌肉。脚踝的结缔组织被剪刀扭曲脱位后。
  抓住胫骨远端,注意不要割伤肌腱,将胫骨向上拉离身体和指甲板。然后去除膝盖长骨上残留的任何结缔组织以及附着在股骨和胫骨上的任何肌肉或结缔组织。抓住股骨,髌骨朝外,股骨头朝下。
  过度拉伸膝盖并扭转剪刀以使胫骨和股骨脱臼。然后去除连接股骨和胫骨的所有结缔组织。接下来,握住股骨,正面朝外,股骨头向下,然后将剪刀沿股骨干向上引导至髁。
  轻轻地来回转动剪刀,去除髁突、髌骨和骨骺,露出干骺端。然后,用镊子、剪刀和低尘擦拭纸去除附着在股骨上的任何肌肉或结缔组织。接下来,抓住胫骨,正面朝外,脚踝端朝下。
  如果胫骨骨骺完好,将剪刀沿胫骨轴向上引至髁突,轻轻来回转动剪刀,将髁突和骨骺取出,露出胫骨干骨骺。然后移除附着在胫骨上的任何肌肉或结缔组织,如图所示。要获得骨髓,首先将一根18号针头穿过0.5ml微量离心管的底部。
  然后将长骨放入管中,膝盖向下,盖住。将0.5ml微量离心管放入1.5ml微量离心管中,在大于等于10000倍g的微量离心管中离心15秒。目视检查证实骨髓已从骨头中分离出来小鼠骨髓间充质干细胞。