4T1 （小鼠乳腺癌细胞）特性、培养与应用

　　在肿瘤学、免疫肿瘤学及抗肿瘤药物筛选研究中，选择合适的小鼠同源肿瘤模型至关重要。4T1 （小鼠乳腺癌细胞）是一种源自BALB/c小鼠自发性高转移性乳腺腺癌的上皮样细胞系，因其能在没有免疫抑制的前提下在同源BALB/c小鼠体内形成原发性肿瘤并自发转移至肺、肝、骨和淋巴结，且对抗人HER2单抗等人类靶点药物不敏感（避免交叉反应干扰），被广泛用作人三阴性乳腺癌（TNBC）的同源移植模型，是评估化疗药、免疫检查点抑制剂（抗PD-1/PD-L1、抗CTLA-4）及CAR-T/CAR-NK疗法效果的金标准细胞系之一。
 

　　细胞生物学特征

　　4T1细胞呈典型的上皮样铺展形态，贴壁生长，形成致密单层后可形成局部堆叠与集落。其主要特征包括：

　　激素受体状态：ER（雌激素受体）阴性、PR（孕激素受体）阴性、HER2低/不表达——模拟人三阴性乳腺癌表型。

　　高转移性：静脉注入可形成肺转移结节；原位（第4对乳腺脂肪垫）接种后肿瘤原发灶生长迅速，并自发经血行转移至肺（最常见）、肝脏、肾上腺、骨骼及引流淋巴结，转移谱接近人乳腺癌晚期。

　　MHCI类分子表达正常，可在免疫健全BALB/c小鼠中引发T细胞应答，故适合研究肿瘤免疫逃逸与免疫治疗的体内药效。

　　可转染，常用作构建稳定表达荧光蛋白（GFP、mCherry）或荧光素酶的报告细胞株，便于活体成像（IVIS）追踪转移灶。

　　体外培养条件

　　4T1细胞通常用含10%胎牛血清（FBS）及1%青霉素-链霉素双抗的RPMI-1640或DMEM高糖培养基，在37℃、5%CO₂湿润培养箱中传代。建议使用0.25%胰酶-EDTA消化，传代比例1:3～1:6，避免过密汇合导致分化状态改变。冻存保护剂多用含10%DMSO的培养基，液氮气相保存。STR鉴定与支原体检测是入库与放行质控要点。

　　主要应用场景

　　抗肿瘤药物体内药效评价：原位或皮下接种于6～8周龄雌性BALB/c小鼠，评估化疗药物（紫杉醇、阿霉素等）、小分子靶向药及纳米载药系统的抑瘤率与转移抑制效果。

　　肿瘤免疫学研究：配合免疫检查（α-PD-1、α-CTLA-4）、TLR激动剂、肿瘤疫苗或过继性T细胞治疗，观察CD8⁺T细胞浸润、MDSC（髓源性抑制细胞）比例变化及细胞因子风暴情况。

　　转移机制研究：利用报告基因标记细胞，通过活体成像、组织切片免疫组化及流式细胞术追踪循环肿瘤细胞（CTCs）与远端器官定植过程，研究EMT（上皮-间质转化）、侵袭相关基因表达。

　　药物安全性与药代动力学辅助模型：作为临床前毒理批次的伴随肿瘤模型动物。

　　4T1 （小鼠乳腺癌细胞）以其同源免疫背景下的高转移特性和成熟的体内建模方法，架起了基础肿瘤生物学与免疫肿瘤学临床前验证之间的桥梁，是乳腺癌研究领域使用广泛的鼠源肿瘤模型之一。