欢迎来到武汉普诺赛生命科技有限公司网站！
咨询热线

400-999-2100

当前位置：首页  >  技术文章  >  磷酸盐缓冲液需要稀释到多少才可以使用？

磷酸盐缓冲液需要稀释到多少才可以使用？

更新时间：2025-08-29  |  点击率：71

磷酸盐缓冲液(PBS)是否需要稀释以及稀释到何种浓度，主要取决于具体实验需求。以下是不同场景下的稀释建议及注意事项：

一、是否需要稀释？

  1. 无需稀释的场景
    • 细胞实验：标准PBS(0.01 M，pH 7.4)可直接用于细胞洗涤、重悬或传代培养。
    • 分子生物学实验：如Western blot、ELISA中样本稀释或洗涤，通常使用标准浓度。
    • 组织学处理：组织切片漂洗、抗原修复后洗涤等，标准浓度即可满足需求。
  2. 需要稀释的场景
    • 高盐敏感实验：如某些蛋白质透析或酶活性测定，需降低NaCl浓度(如稀释至0.14 M)。
    • 特殊细胞类型：某些原代细胞(如神经元)对渗透压敏感，需用低盐PBS(如0.001 M磷酸盐+0.137 M NaCl)。
    • 药物稳定性测试：模拟体内低盐环境时，可能需稀释至生理盐水浓度(0.9% NaCl，约0.15 M)。

二、常见稀释比例及用途

稀释比例 目标浓度 典型用途
1:1（原液） 0.01 M磷酸盐 + 0.137 M NaCl 细胞培养、Western blot、ELISA、免疫组化洗涤
1:10 0.001 M磷酸盐 + 0.0137 M NaCl 特殊细胞（如神经元）洗涤、低盐需求实验
1:100 0.0001 M磷酸盐 + 0.00137 M NaCl **低盐环境模拟（如某些酶活性测定）
调整NaCl浓度 0.01 M磷酸盐 + 0.014 M NaCl 降低渗透压至生理盐水水平（0.9% NaCl）

三、稀释方法

  1. 体积比稀释
    • 示例：将10 mL标准PBS加入90 mL去离子水，得到1:10稀释液。
    • 工具：使用移液器或量筒精确量取，避免污染。
  2. 质量体积比稀释
    • 适用场景：需精确控制NaCl浓度时（如配制0.01 M磷酸盐 + 0.014 M NaCl）。
    • 计算：根据目标浓度计算所需NaCl质量（如0.014 M × 58.44 g/mol × 1 L = 0.818 g NaCl/L）。
  3. 分步稀释
    • 步骤：先稀释磷酸盐浓度，再调整NaCl浓度（如需同时降低两者）。

四、稀释后验证

  1. pH测量
    • 稀释可能改变pH，需用pH计重新测定并调节至目标值（如7.4）。
    • 调整方法：滴加浓盐酸（降低pH）或氢氧化钠（升高pH）。
  2. 渗透压检测
    • 使用渗透压计验证稀释液是否符合实验要求（如细胞培养需280-320 mOsm/kg）。
  3. 无菌性检查
    • 若稀释后用于细胞实验，需通过滤膜过滤（0.22 μm）或高压灭菌确保无菌。

五、注意事项

  1. 避免反复冻融
    • 稀释后的PBS应分装保存，避免反复解冻导致pH或渗透压变化。
  2. 兼容性测试
    • *次使用稀释液时，需进行预实验验证其对细胞活性或实验结果的影响（如MTT实验检测细胞毒性）。
  3. 标记与记录
    • 稀释液需明确标注浓度、pH、配制日期及灭菌状态，避免混淆。
  4. 特殊实验需求
    • 透皮吸收实验：可能需稀释至与接收液成分一致（如含4% BSA的PBS）。
    • 蛋白质电泳：需使用无NaCl的磷酸盐缓冲液（如Tris-Glycine系统）。