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细胞学堂 | 超详细的凋亡检测试剂盒选择指南!

更新时间:2024-06-28  |  点击率:497


细胞凋亡(Apoptosis),作为一种深入研究的程序性细胞死亡形式,近年来已成为生物学领域的热门课题。如果你的研究涉及癌症机制与疗法、药物筛选与药理作用、生物发育、免疫学或神经科学等领域,细胞凋亡检测无疑是你实验设计中重要的一环。




在本期的细胞学堂中,我们将深入介绍不同类型凋亡检测试剂盒的相关知识,并分享一些关于如何选择凋亡检测试剂盒的经验,旨在帮助您轻松理解并为您的样本选择合适的凋亡检测试剂盒。





常用凋亡检测试剂盒的检测原理

凋亡细胞在细胞形态和生理上与坏死细胞和正常细胞存在显著不同,其细胞膜、细胞质、细胞核、核酸以及凋亡相关蛋白都发生明显变化,具有鲜明特征。这些差异为我们提供了检测细胞凋亡的多种方法。常用的细胞凋亡检测方法包括形态学观察、细胞膜磷脂外翻检测、凋亡相关蛋白检测、DNA断裂检测、细胞周期分析等。这些方法各有特点,可以根据实验需求和条件选择合适的检测方法。

根据细胞凋亡的机制和特点,普诺赛®自主研发了Annexin V凋亡检测试剂盒TUNEL凋亡检测试剂盒Caspase活性检测试剂盒线粒体膜电位(JC-1)检测试剂盒

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Annexin V凋亡检测试剂盒

检测原理:Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸(PS)有高度亲和力。在正常细胞中,PS通常位于细胞膜内侧。然而,当细胞发生凋亡时,细胞膜的通透性会发生变化,细胞膜内侧的PS部分外翻,暴露到细胞膜外侧。Annexin V可通过与凋亡早期细胞胞外翻的PS结合,从而识别凋亡细胞。为了更便于检测,将Annexin V标记上荧光染料,可通过流式细胞仪或荧光显微镜等设备检测到带有荧光的凋亡细胞。细胞核染料(PI、DAPI、7-AAD)可与双链DNA特异性结合,并产生强烈的荧光。正常情况下大分子的核染料是无法透过细胞膜,由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,细胞核染料可进入细胞内对DNA进行染色,与Annexin V搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。

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TUNEL凋亡检测试剂盒

检测原理:在细胞凋亡的晚期,染色体DNA双链断裂产生大量的粘性3'-OH末端。在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,脱氧核糖核苷酸与荧光素等标记物形成的衍生物可以被标记到断裂DNA的3'-末端,从而进行凋亡细胞的检测。

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Caspase活性检测试剂盒

检测原理:Caspase是一个蛋白酶家族,通常以无活性的酶原形式存在于细胞质中。活化的Caspase会破坏一些重要的胞内蛋白,从而引发凋亡的发生。将Caspase序列特异性的多肽酶偶联至黄色基团pNA作为底物,当Caspase被活化后,它能够剪切这个底物,释放出游离的黄色基团。通过酶标仪或分光光度计测定这些黄色基团的吸光值,就可以定量评估Caspase的活性,从而间接地监测细胞凋亡的情况。

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线粒体膜电位(JC-1)检测试剂盒

检测原理:在正常细胞中,线粒体膜电位通常较高,JC-1主要在线粒体基质中聚集,以聚合体的形式存在,可产生红色荧光。然而,在细胞凋亡的早期阶段,线粒体膜电位会显著降低,导致JC-1无法在线粒体基质中积累,主要以单体形式存在,可产生绿色荧光。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降,可将JC-1荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。





如何选择凋亡检测试剂盒

目前市售的凋亡检测试剂盒种类众多,如何选择一款匹配自己检测样本和实验条件的试剂盒至关重要。以下是两点可供参考的建议:

01

基于样本类型选择

根据具体实验设计和样本类型,选择合适的凋亡检测试剂盒。推荐您参考下方表格所示的内容,以便为您的样本类型选择适当的凋亡检测试剂盒。例如悬浮细胞或经消化下来的贴壁细胞,四种凋亡试剂盒都可考虑使用,这些试剂盒通常能够适用于不同类型的细胞样本。然而,对于组织样本,需要注意不同的试剂盒样本制备方法可能不同。使用TUNEL凋亡检测试剂盒时,需制备石蜡或冷冻切片,而使用Caspase活性检测试剂盒时,则需对组织进行机械剪碎、匀浆和裂解

02

基于实验仪器和配置选择

不同凋亡检测试剂盒的使用需要配备对应的仪器。推荐您参考下方表格,根据实验室现有的实验仪器,选择合适的凋亡检测试剂盒。需要提醒的是,除了确认仪器是否可用,还需要了解实验仪器的具体配置,例如流式细胞仪的荧光检测通道和荧光显微镜的滤光片组等。

市售的Annexin V凋亡检测试剂盒和TUNEL凋亡检测试剂盒,有多种荧光染料组合可供选择。在选择荧光染料时,需根据仪器配置选择能够检测的荧光染料。除此之外,如果您的细胞自带荧光(如转染了荧光蛋白的细胞或使用了带荧光的药物处理细胞),在仪器配置允许的前提下,优先选择与细胞自发荧光不同检测通道的荧光染料。如果受限于仪器配置条件,无法避免荧光染料光谱重叠,要注意合理设置单染管用于调节补偿,以确保检测结果的准确性。






普诺赛®凋亡检测试剂盒相关信息

试剂盒种类

检测样本

检测仪器

Annexin V凋亡检测试剂盒

悬浮/贴壁细胞

流式细胞仪、荧光显微镜

TUNEL凋亡将测试剂盒

悬浮/贴壁细胞

流式细胞仪

细胞爬片/涂片、石蜡切片、冷冻切片

荧光显微镜

Caspase活性检测试剂盒

细胞、组织

分光光度计、酶标仪

线粒体膜电位(JC-1)检测试剂盒

悬浮/贴壁细胞

荧光显微镜、流式细胞仪



以上是关于凋亡检测试剂盒的知识科普及选择指南,更多细胞培养和检测相关干货,请持续关注细胞学堂专栏~