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直播答疑 | 原代细胞培养常见问题及解决方案

更新时间:2023-11-14  |  点击率:538

原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首-次培养,也叫初代培养,是细胞系建立的第一步。

在9月22日开播的“原代细胞常见问题解决方案"课程中,有很多老师就原代细胞培养问题提出了疑问。我们筛选出部分代表性问题,并作了详细解答。


脐静脉内皮细胞需要包被吗?选用什么包被比较好?

脐静脉内皮细胞建议包被,建议选用0.1%明胶包被,包被的细胞形态会比不包被的好看。


角质细胞需要包被吗?

角质细胞生长类似上皮细胞,营养环境要求高,建议使用胶原蛋白包被。


细胞原皿状态很好,传代后细胞边界不清楚是什么原因?感觉虚化的很快。

传代后边界不清晰,考虑细胞是否需要外基质条件,尝试包被培养瓶;其次考虑细胞是否老化、分化。


请问真菌污染了怎么办?就丢了这瓶细胞吗?

真菌污染细胞,建议丢弃,避免对其他细胞造成交叉污染,损失更大;若要挽救,建议隔离培养,加两性-霉素B等抗生素,每天换液,持续清除,但只能维持几周,后续培养会反复爆发,耗费成本更高。


支原体污染会改变细胞的形状吗?细胞里面也有很多小碎片,这该怎么办?用抗支原体药可以去除细胞外碎片,但是细胞里的无变化。

污染较轻的,不会影响细胞状态,出现大量碎片,细胞内部也有碎片,污染就很严重了,支原体清除试剂对外部清除有效,内部较难清除;同时在细胞内部已损伤情况下,没有必要清除,此时细胞已经丧失很多功能,建议废弃。


肝细胞培养中包被对其影响大吗?

肝细胞营养环境要求较高,建议包被,不包被影响贴壁率(低于50%),长时间培养不包被会导致细胞卷曲聚团,影响状态。


原代人牙周膜细胞冻存复苏后贴壁很少且生长很慢,怎么处理呢?

原代细胞复苏贴壁少,生长慢,首先是调整细胞密度保持在70%以上,确保生长状态,其次选用高质量血清或培养基进行补救,也可以补加5%血清。


小鼠原代雪旺细胞传代后不增殖怎么办?

一般建议:

1

静置培养细胞,细胞在稳定环境下更易生长,一般3-5天可有变化;

2

调整细胞密度,控制在70%-80%,更利于细胞生长;

3

补加适量血清促进细胞增殖,或更换质量更高的血清,提高营养因子促进细胞生长。雪旺细胞分离初期1-2周是处于停止增殖状态的,度过该时期才会增殖。


原代细胞的红细胞较多怎么办?需要红细胞裂解液吗?

分离初期红细胞较多,可用淋巴细胞分离液或Percoll分离液分离,也可用裂解液处理。


原代分离肺动脉平滑肌细胞,酶消化法和贴壁法,哪个更好呢?

贴壁法细胞爬出慢,周期长,成功率不高耗费时间,得到的细胞活性相对高;消化法,速度快,数量多,刚分离的活性差一点,后期培养要适应,看自主需求选择。


干细胞传代次数有限制吗?

理论上无传代次数限制,实际培养中,受离体培养环境变化、血清质量、培养基质量、传代损伤等外部培养环境影响,细胞超过10代以上会出现分化、不增殖、老化凋亡等问题,所以常规建议10代以内使用。


我们取的骨骼肌卫星细胞,在大皿养没事,一换液就漂,是啥原因?

骨骼肌卫星细胞,本身贴壁性不强,易漂浮,特别是局部密度大会导致细胞聚集成束,最后分化形成肌管束,建议培养中均匀接种,包被增强吸附性,控制密度在70-80%。


脂肪细胞原代培养分离细胞时,没有细胞怎么办?

脂肪细胞原代培养没分出细胞,一是要检查分离方法是否正确,中间每一步操作最好进行镜检,可以找出是哪一步损失细胞的,二是考虑后面离心步骤是否损失细胞,细胞包含脂滴,密度较小,漂浮丢弃了也有可能。