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细胞学堂 | 从传代到换液,养好22RV1

更新时间:2023-07-18  |  点击率:732

22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其父亲的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系[1]。此细胞系表达前列腺特异抗原PSA。二羟基睾丸脂酮可轻微刺激细胞生长,经Western Blot检测溶解产物与抗雄性激素受体抗体起免疫反应。EGF可刺激细胞生长,但TGFβ-1不能抑制细胞生长。该细胞在裸鼠中成瘤。近年来,研究表明22RV1产生高滴度的人类逆转录病毒XMRV(异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒)。



细胞特性

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形态

上皮样细胞单层贴壁生长

倍增时间

~40 hours

抗原表达

前列腺特异性抗原(PSA)

表达标志物

雄激素受体

生长培养基

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

 ✦ 

培养注意事项


1

该细胞有密度依赖,传代比例不宜超过1:4;

2

细胞复苏时需要离心去除DMSO,离心接入皿中,静置两天,保持培养箱环境稳定。冻存细胞复苏最初阶段,贴壁量少,成簇松散贴壁,但是最终细胞会变平,并且扩散成很好的单层,这个过程需要4-5天时间;

3


4


细胞冻存后复苏成活率不高,推荐冻存液配比为90%血清+10% DMSO;

细胞生长缓慢,细胞只能生长到90%的汇合度。


传代步骤


1

吸出原培养液;


2

加入2mL左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃;


3

加入1mL左右胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;


4

放入培养箱消化,消化2- 3分钟左右,显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆且自然脱落(细胞一定要彻-底消化下来,全程不要拍打培养瓶);


5

加入3mL含血清的培养基终止消化,轻轻/反复吹打细胞,在显微镜下观察,细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液;;


6

收集细胞悬液离心,1000-1200rpm(250-300g)/min,3-5分钟,离心完吸出上清丢弃;


7

加入新鲜培养基,吹打几下混匀细胞即可,按需接种到新培养瓶,补足足量培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养;


8

检查培养箱二氧化碳,温度和水盘。


换液步骤

01

吸出旧培养基并沿培养瓶侧边(非培养细胞容器底部)添加新的培养基;

02

每2-3天换液一次;



传代比例和频次

细胞长满80%后,按照1:2的比例传代,2-3天可再次生长到80%;1:3传代,再次长满到80%需要3天以上的时间。


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细胞正常生长图片


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ATCC图片





[1] Sramkoski RM, Pretlow TG 2nd, Giaconia JM, Pretlow TP, Schwartz S, Sy MS, Marengo SR, Rhim JS, Zhang D, Jacobberger JW. A new human prostate carcinoma cell line, 22Rv1. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1999 Jul-Aug;35(7):403-9. doi: 10.1007/s11626-999-0115-4. PMID: 10462204.


[2] Knouf EC, Metzger MJ, Mitchell PS, Arroyo JD, Chevillet JR, Tewari M, Miller AD. Multiple integrated copies and high-level production of the human retrovirus XMRV (xenotropic murine leukemia virus-related virus) from 22Rv1 prostate carcinoma cells. J Virol. 2009 Jul;83(14):7353-6. doi: 10.1128/JVI.00546-09. Epub 2009 Apr 29. PMID: 19403664; PMCID: PMC2704771.





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