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细胞学堂|MEG-01培养注意事项

更新时间:2023-06-30  |  点击率:730



基本信息

1

细胞名称

MEG-01 (人成巨核细胞白血病细胞)

2

别名

Meg-01; MEG01; Meg01

3

细胞培养条件

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S,37℃;5% CO2

4

生长特性

半贴半悬 

5

细胞形态

淋巴母细胞样



背景资料


MEG-01是一种巨核母细胞系,该细胞来自于一名费城染色体(Ph)阳性的慢性粒细胞性白血病(CML)患者。1983年由Michinori Ogura, Yasuo Morishima等人从一名55岁患有慢性粒细胞性白血病(CML)且处于CML爆发危机的男性的骨髓样本中提取。


MEG-01细胞没悬浮的细胞大多为圆形或者卵圆形,贴壁的细胞会伸出伪足。细胞质相对嗜碱性,并含有少量空泡,还观察到细胞质突起。单克隆抗体的间接免疫荧光试验显示,MEG-01细胞表面的FVIII相关抗原呈阴性,该抗原在MEG-01细胞特别是大细胞的细胞质中呈阳性。所有细胞均呈弥漫性和细颗粒状的酸性磷酸酶强阳性。


MEG-01不仅为研究人类巨核细胞分化和成熟提供研究模型,而且为血小板或蛋白质如FVIII相关抗原、血小板糖蛋白或血小板衍生生长因子(PDGF)等的产生和释放提供一种有用的研究模型。


细胞特性

培养中始终存在一些黑点样碎片,不需要特殊处理。大部分细胞呈不规则圆形悬浮状态,有少量细胞呈梭形贴壁。


培养方法


以T25瓶为例

1

该细胞为半贴壁半悬浮细胞,其中贴壁细胞较少或到50%均为正常,可以按悬浮细胞的培养方式传代,贴壁部分吹下即可(如遇吹不下来,可用0.25%胰酶适当消化);

2

维持细胞密度在3-10×105cells/mL培养,初始接种密度不低于3×105cells/mL,长到10×105cells/mL左右进行传代。建议前期计数后操作,后面可以根据经验传代;

3

每隔3天计数操作一次,如密度低于3×105cells/mL可更换小体积容器(如孔板)进行培养;

4

根据细胞密度选择其中一种操作方法:


方法一


半换液。如密度不足8×105cells/mL则进行半换液;缓缓吸出上层一半的培养液,于1200 rpm(250g左右) 3min离心收集细胞,加入等体积新鲜培养基重悬细胞,轻轻吹打3-5次,接回原瓶继续培养;


方法二


1:2稀释传代。如密度接近10×105cells/mL左右,则将细胞等体积分装到两个新培养瓶,每瓶分别补加新鲜培养基到总体积5mL;


方法三


全离心换液或传代。细胞每持续培养超一周可进行一次全离心换液或者传代,不建议频繁用离心的方式换液或传代;离心转速推荐1200rpm 3min。


特殊注意事项

01


该细胞增殖较慢,比较脆弱,培养中减少观察挪动,维持稳定的培养温度和环境;

02


尽可能减少吹打次数,取样计数或者传代时轻轻吹打3-5下混匀细胞即可;

03


传代后每天观察细胞状态,如果密度太大,不及时处理,细胞容易死亡,需严格控制培养密度;

04


至少每3天需要将细胞半换液或者传代一次,一周左右全部离心换液一次。


冻存与复苏

推荐冻存密度:


3~5×106 cells/mL ;


冻存液配比:


55% RPMI-1640 +40% FBS+5%DMSO,需使用程序冻存盒梯度降温冻存。


生长图片

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图1:建系文档中的MEG-01细胞图


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图2:ATCC培养图,来源于ATCC


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图3:普诺赛培养图




参考文献:


[1] Ogura M, et al. Establishment of a novel human megakaryoblastic leukemia cell line, MEG- 01, with positive Philadelphia chromosome. Blood 66: 1384-1392, 1985. PubMed: 2998511