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细胞学堂 | 脱落的293T细胞如何恢复正常

更新时间:2023-02-16  |  点击率:605





293T [HEK-293T](人胚肾细胞)是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。该细胞广泛应用于病毒包装,因其比较容易转染,也是常用的表达研究外源基因的细胞株。

图1. 293T正常生长图片


该细胞因为贴壁松散,若购买常温细胞,收货时有可能大部分细胞脱离培养瓶壁,显微镜下找不到细胞,只能看到肉眼可见的细胞团,是正常现象(如图2)。


图片

图2. 293T收货聚团(图由客户提供,仅供学习参考)


参照以下方式处理即可恢复正常:

1

收到细胞后请先置于培养箱中稳定2 ~ 4h后再进行下一步处理,不建议放置培养箱过夜后处理;

2

将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,1200rpm离心3min收集细胞;

3

去掉上清,用PBS重悬细胞(以手摇离心管的方式重悬,不要用移液枪吹),将细胞收集到一个离心管中,再次1200rpm离心3min;

4

去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重悬细胞(还是以手摇离心管的方式混匀,不要吹细胞), 放入培养箱消化2min;

5

消化2min后,加入5mL完-全培养基混匀终止消化,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,1200rpm离心3min;

6

去掉上清,加入6mL左右细胞相应的完-全培养基混匀,视细胞量决定是1:2传代-还是1:3传代(由于细胞运输有损伤,首-次传代建议比平时养密度稍高);

7

显微镜下观察细胞是否有分散成单颗现象,若有明显很大的细胞团需要重复上述步骤二次消化;

8

第二天及时观察细胞贴壁情况,若贴壁细胞量过多,造成细胞堆积,贴壁24h后再次传代分瓶,若密度正常则继续生长,不建议换液,贴壁48h后换液去掉不能贴壁的细胞。


培养注意事项


细胞贴壁松散,操作时应轻拿轻放;


培养时可将培养瓶/皿进行包被;


PBS润洗时动作应缓慢,避免冲走细胞;


细胞传代第二天可能有轻微聚团现象,再长一天能长开,不建议传代第二天换液,以免损失细胞。