RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)是破骨细胞、炎症研究最-常用的体外模型之一,被广泛用于研究风湿性关节炎、骨质疏松症、骨质溶解、牙周炎等骨骼疾病。
极化方式
巨噬细胞是具有异质性的一类免疫细胞,在体内外不同环境影响下可极化为不同表型参与机体生理、病理反应。从激活方式上分为经典激活的巨噬细胞M1和选择性激活的巨噬细胞M2。
细菌和脂多糖(LPS)可以诱导巨噬细胞向M1型分化,产生促炎细胞因子,抵抗病原入侵,但也会造成机体损伤,在实验中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小时诱导其极化;
图1. a.RAW 264.7 未分化形态图 b.RAW 264.7 M1型分化形态图
白细胞介素(IL-4)可以诱导巨噬细胞向M2型分化,分泌抗炎细胞因子,并在组织修复与重建和肿瘤的形成过程中发挥作用,在实验中可采用10ng/mL IL-4作用12小时诱导其极化。
图2. RAW 264.7 不同分型形态图
鉴定方法
M1、M2具有各自特征性标志分子,iNOS、CD86、TNF-α是常见的M1型巨噬细胞的标志分子,IL-10、Arg-1、CD206是常见的M2型巨噬细胞标志分子。一般在实验研究中:
WB可以分析RAW264.7细胞iNOS、YM-1和Arg-1的表达水平(如图3);
图3. WB分析照射对IL-4诱导的RAW264.7细胞YM-1和Arg-1的表达影响
流式细胞术(FCM)可以分析RAW264.7细胞表面CD86和CD206的表达(如图4);
图4. 流式细胞术分析照射对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞CD206和CD209的表达
实时定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等细胞因子的表达及分泌(如图5);
图5. 用于实时荧光定量PCR的引物序列
Griess reagent 可以分析细胞培养上清 NO 生成(如图6)。
图6. 不同样品对RAW 264.7中NO产生的影响
参考文献