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小鼠骨髓间充质干细胞是怎么获得的?

更新时间:2022-06-23  |  点击率:874
  小鼠骨髓间充质干细胞是怎么获得的?一般采用长骨解剖和骨髓分离程序,总体目标是快速、系统地取出长骨,并收集骨髓细胞进行进一步的实验分析。这种方法有助于回答有关骨髓生物学、肿瘤转移和免疫学的关键问题。这项技术的主要优点是解剖过程快速、标准化,骨髓分离程序相当无菌,首先处死小鼠并将小鼠置于仰卧位。
  
  然后将小鼠的四个爪垫固定在踝关节下方,用70%乙醇喷洒小鼠,*冲洗腿部。下一步,在臀部正上方的下腹部中线右侧做一个小切口,将切口向下延伸到腿部,穿过踝关节。拉回皮肤。
  
  然后切开固定在股骨近端的股四头肌,露出大腿骨的前侧,并用销钉将肌肉从腿部固定出来,与木板成45度角。用剪刀抵住股骨后侧,从膝关节上剪下腘绳肌。然后将固定在股骨近端的皮肤和腘绳肌向后拉,露出骨的后侧,并将腘绳肌从腿部固定出来,使固定销成45度角。
  
  用镊子抓住股骨远端,刚好在膝关节上方。然后引导股骨干两侧的剪刀刀片朝向髋关节。到达股骨头后,扭转剪刀,将顶部刀片直接移到股骨头上方,使股骨脱臼。
  
  用镊子抓住股骨干的顶部,从股骨头上切下软组织,将股骨从髋臼中取出。然后将整个腿骨,包括股骨、膝盖和胫骨向上拉离身体,小心地切断连接腿部与皮肤的结缔组织和肌肉。当所有的结缔组织都被移除后,拉伸踝关节并扭转剪刀,使胫骨脱臼。
  
  抓住胫骨远端,注意不要切断肌腱,将胫骨向上拉离身体和钉板。然后去除任何残留在膝盖长骨上的结缔组织,以及任何附加在股骨和胫骨上的肌肉或结缔组织。抓住股骨,使髌骨朝外,股骨头朝下。
  
  过度伸展膝关节,扭动剪刀,使胫骨与股骨脱臼。然后移除所有连接股骨和胫骨的结缔组织。下一步,抓住股骨,使前侧朝外,股骨头朝下,然后将剪刀沿股骨干向上引导至髁部。
  
  轻轻地来回旋转剪刀,去除髁突、髌骨和骨骺,露出干骺端。然后,用镊子、剪刀和低尘擦拭纸去除任何附加在股骨上的肌肉或结缔组织。下一步,抓住胫骨,前侧朝外,踝端朝下。
  
  如果胫骨骨骺完好无损,将剪刀沿胫骨轴向上引至髁突处,轻轻来回转动剪刀,将髁突和骨骺切除,露出胫骨干骺端。然后移除任何附加在胫骨上的肌肉或结缔组织,如刚才所示。为了获取骨髓,首先用一根18号的针穿过一根0.5毫升的微量离心管的底部。
  
  然后把长骨放进管子里,膝盖朝下,盖上盖子。将0.5毫升的微型离心管放入1.5毫升的微型离心管中,并在大于或等于10000倍g的微型离心管中离心15秒。通过目视检查确认骨髓已经从骨头中旋出。
  
  1、使用10mL注射器,抽出小鼠骨髓间充质干细胞。
  
  2、转移至50mL锥形管中,用FSB将体积增加至50mL。
  
  3、将50uL样品转移到eppendorf试管中,并进行细胞计数。
  
  4、以1200转/分的转速旋转细胞8分钟。
  
  5、从离心细胞中倒出上清液,转入干细胞*培养基中进行培养。