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大鼠海马神经元细胞培养和传代流程

发表时间:2022-04-22  |  点击率:317
  体外培养大鼠海马神经元细胞细胞周期有限;建议使用与procell配套的专用生长培养基和正确的操作方法进行培养,以保证细胞处于理想培养状态。procell实验室分离的大鼠海马神经元细胞采用胰蛋白酶消化、神经元特异性培养基培养、筛选结合化学试剂抑制制备。细胞总数约为5×105个细胞/瓶。
  
  大鼠海马神经元细胞培养和传代流程(请严格按照无菌操作):
  
  1、从原培养瓶中吸出培养基,用PBS缓冲液润湿细胞两次,加入2-3ml025%胰蛋白酶消化细胞(注意消化时间,一般控制在1-2min内);
  
  2、在显微镜下观察消化情况。当细胞边缘收缩松散贴壁时(不建议消化到细胞漂浮),去除胰蛋白酶,加入6-8ml*培养基,轻轻吹干细胞层,尽量吹散细胞层;
  
  3、将部分细胞悬液转移至新的培养皿/瓶中,加入适量的*培养基,将细胞悬液打匀,放入培养箱中培养;
  
  4、注意培养基pH值的变化,定期更换溶液(每周2-3次),待细胞密度达到80%后重复1次操作或冷冻保存。
  
  特别注意:如果使用公共实验室接触大鼠海马神经元细胞培养,建议添加双抗体培养。
  
  1、收到细胞后,请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基。如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%血清(原瓶培养基连续使用时间不超过72小时);
  
  2、贴壁细胞在收到当天不要立即消化。请更换细胞溶液,放入培养箱中孵育至次日进行消化和继代培养。请优先使用直径6cm的培养皿进行继代培养;
  
  3、培养瓶壁破裂、漏水,请及时拍照记录并与实验室联系。