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直播答疑 | 普诺赛3月直播:细胞系由来及鉴定问题

发表时间:2022-04-14  |  点击率:357
普诺赛3月30日开播的细胞培养直播课堂中,有很多同学提出各种疑问。我们筛选出具有代表性的问题,并作了详细解答。

01 动物细胞怎么鉴定?

要根据实验的目的以及细胞类型进行选择。如果是人源细胞系,并且有文献或数据库公布对应细胞信息,则进行STR鉴定即可;如果使非人源的细胞系,可以进行种属鉴定,并且附加一个研究方向相关的指标进行验证,部分小鼠细胞也可以做STR鉴定,但目前数据库不*,很多都没有匹配数据。对于原代细胞,如果能够确保取材无误,仅进行特异性指标方面的检测就可以了,方法可采用免疫荧光、流式检测、WB检测等。

02 发表高水平文章时,需要提供哪些文件呢?COA?STR?

目前*的细胞鉴定文件为STR鉴定,对于不适用STR鉴定方法的细胞,可以根据自己的研究方向对细胞进行验证,方法没有限制,一些新的技术和方法的应用能够一定程度上提高文章的档次。

03 原代细胞和细胞系有啥区别?

主要是传代次数上的差异。原代细胞一般指从动物组织直接提取的细胞,而细胞系是在原代培养的基础上经过传代和筛选得到。另外常用的细胞系,都是经过筛选得到的稳定细胞群体,特性在进行连续性实验时能够保证结果更加稳定,而原代细胞的优势则在于与机体细胞特征更加接近。

04 pc12细胞高分化后,多次传代会影响实验结果吗?

PC-12(高分化)细胞是稳定的细胞系,正常传代不会改变细胞特性,但是传代过程中如果出现生长过度、污染等异常情况可能会导致细胞发生变化,所以建议在低代次时冻存保种。若是自行诱导建系的高分化PC-12细胞,则要看诱导后得到的细胞特性是否稳定,一般也是建议在细胞状态稳定时冻存,避免后续长期传代培养过程中出现意外。

05 H22的STR为啥和NIH/3T3的STR基本相似?

首先要明确一点,H22和NIH/3T3两株细胞在特性上差异较大,混淆的概率非常小,而STR位点数据相似,可能是由于这两株细胞本身亲缘关系非常接近。由于很多品种的小鼠都是近交品系,同种小鼠本身亲缘关系就比较近,这就有可能导致不同的小鼠细胞会出现位点接近的情况,这也是目前小鼠STR没有广泛应用的原因之一。

06 肿瘤相关成纤维细胞也需要自己鉴定吧?

做细胞鉴定需要先明确鉴定的目的。如果自己提取的肿瘤细胞或者癌旁的成纤维细胞,可以用免疫学的方法去确定得到的细胞是属于什么类型。

07 ATCC为什么看不到HSC?

HSC细胞从名称上来看应该是原代提取细胞的简称,或者是简写的名称,并没有写全。通用的标准细胞系中,没有HSC这株细胞的信息。另外,ATCC并没有收录所有种类的细胞系,很多国内建系的细胞也无法查到,可以参考PPT中讲到的查询方法,多查几个细胞库的资源看看
(如需PPT视频,请移步普诺赛,直线联系各区*)

08 细胞系具有无限增殖的能力,正常的细胞培养成细胞系之后,那不是很多蛋白的表达都改变了,做蛋白质差异表达分析的不是就不准了吗?

细胞系具有无限增殖的能力,同时它的另一个要求是稳定传代。如果是在培养中或者经过筛选得到另外一种特性的细胞,则可以定义为一株新的细胞系;如表达/不表达某某蛋白的细胞,在不经过特殊处理的情况下,传代过程中细胞发生变异的概率极低。培养条件不改变的情况下,短期内不需要担心蛋白表达发生变化。

09 BGC胃癌细胞是不是也是污染了?

如果指的是BGC-823细胞,这株细胞确实是建系时被Hela污染的,相关信息可以在Expasy网站上查到。

10 在肺泡灌洗液找到了一组细胞,但是我们想鉴定一下到底是什么细胞,有什么办法吗?

先推断可能的细胞种类,再根据这些种类选择对应的指标进行鉴定。如肺泡灌洗液中最可能出现的就是巨噬细胞或脱落的上皮细胞,根据这些种类细胞的指标进行鉴定即可。

11 鸡细胞怎么做鉴定?

确定鸡的种属可以用PCR法,设计种属特异性的引物进行鉴定;要确定细胞的类型可以用免疫学的方法,选择对应的抗体进行鉴定。

12 从小鼠原代细胞系中制备可以传代的细胞系怎样最快?

从原代培养的细胞建立细胞系,可以通过病毒基因转染、端粒酶激活等方法

13 对细胞系进行转染质粒敲除,敲除后的细胞系可以继续传代吗?

有文献研究表明,即使敲除了永生化过程中导入的相关基因后,细胞不会停止继续增殖的情况,反而在细胞特异性分化、分泌代谢等方面趋于成熟。也就是说,即使敲除了转染的基因,细胞系也可以继续传代

4月直播课堂将于4月28日开播,记得关注普诺赛公众号哦~