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原代细胞传代方法哪有几种?

更新时间:2021-05-07  |  点击率:1159

原代细胞是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的
细胞,称为原代细胞。
-般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传
代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞I程等问题的研究。
那么关于原代细胞的传代培养,我们应该怎么做呢?一般有以下两种方法:
一、贴壁细胞的消化法传代
1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。
2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消
化。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬波,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37°C培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞的传代
1、直接传代
①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3.
②用吸管吹打形成细胞悬液后,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37*C培养箱中培养。
2、离心法传代
①将细胞连同培养液一并转移到离心管内 ,离心800-1000rpm , 5分钟。
②去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液。
③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37*C培养箱中培养。